一，普通光學(xué)顯微鏡的主要構(gòu)造

　　普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造主要分為三部分：機(jī)械部分、照明部分和光學(xué)部分。顯微鏡各部分構(gòu)造如下圖：

　　1.機(jī)械部分

　?。?）鏡座：是顯微鏡的底座，用以支持整個(gè)鏡體。

　　（2）鏡柱：是鏡座上面直立的部分，用以連接鏡座和鏡臂。

　?。?）鏡臂：一端連于鏡柱，一端連于鏡筒，是取放顯微鏡時(shí)手握部位。

　?。?）鏡筒：連在鏡臂的前上方，鏡筒上端裝有目鏡，下端裝有物鏡轉(zhuǎn)換器。

　?。?）物鏡轉(zhuǎn)換器(旋轉(zhuǎn)器)：接于棱鏡殼的下方，可自由轉(zhuǎn)動(dòng)，盤上有3－4個(gè)圓孔，是安裝物鏡部位，轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，可以調(diào)換不同倍數(shù)的物鏡，當(dāng)聽到碰叩聲時(shí)，方可進(jìn)行觀察，此時(shí)物鏡光軸恰好對準(zhǔn)通光孔中心，光路接通。

　?。?）鏡臺(tái)(載物臺(tái))：在鏡筒下方，形狀有方、圓兩種，用以放置玻片標(biāo)本，中央有一通光孔，我們所用的顯微鏡其鏡臺(tái)上裝有玻片標(biāo)本推進(jìn)器(推片器)，推進(jìn)器左側(cè)有彈簧夾，用以夾持玻片標(biāo)本，鏡臺(tái)下有推進(jìn)器調(diào)節(jié)輪，可使玻片標(biāo)本作左右、前后方向的移動(dòng)。

　?。?）調(diào)節(jié)器：是裝在鏡柱上的大小兩種螺旋，調(diào)節(jié)時(shí)使鏡臺(tái)作上下方向的移動(dòng)。

　　 ①粗調(diào)節(jié)器(粗螺旋)：大螺旋稱粗調(diào)節(jié)器，移動(dòng)時(shí)可使鏡臺(tái)作快速和較大輻度的升降，所以能迅速調(diào)節(jié)物鏡和標(biāo)本之間的距離使物象呈現(xiàn)于視野中，通常在使用低倍鏡時(shí)，先用粗調(diào)節(jié)器迅速找到物象。

　　 ②細(xì)調(diào)節(jié)器(細(xì)螺旋)：小螺旋稱細(xì)調(diào)節(jié)器，移動(dòng)時(shí)可使鏡臺(tái)緩慢地升降，多在運(yùn)用高倍鏡時(shí)使用，從而得到更清晰的物象，并借以觀察標(biāo)本的不同層次和不同深度的結(jié)構(gòu)。

　　2．照明部分

　　裝在鏡臺(tái)下方，包括反光鏡，集光器。

　　（1）反光鏡：裝在鏡座上面，可向任意方向轉(zhuǎn)動(dòng)，它有平、凹兩面，其作用是將光源光線反射到聚光器上，再經(jīng)通光孔照明標(biāo)本，凹面鏡聚光作用強(qiáng)，適于光線較弱的時(shí)候使用，平面鏡聚光作用弱，適于光線較強(qiáng)時(shí)使用。

　?。?）集光器(聚光器)位于鏡臺(tái)下方的集光器架上，由聚光鏡和光圈組成，其作用是把光線集中到所要觀察的標(biāo)本上。

　?、倬酃忡R：由一片或數(shù)片透鏡組成，起匯聚光線的作用，加強(qiáng)對標(biāo)本的照明，并使光線射入物鏡內(nèi)，鏡柱旁有一調(diào)節(jié)螺旋，轉(zhuǎn)動(dòng)它可升降聚光器，以調(diào)節(jié)視野中光亮度的強(qiáng)弱。

　?、诠馊?虹彩光圈)：在聚光鏡下方，由十幾張金屬薄片組成，其外側(cè)伸出一柄，推動(dòng)它可調(diào)節(jié)其開孔的大小，以調(diào)節(jié)光量。

　　3.光學(xué)部分

　　（1）目鏡：裝在鏡筒的上端，通常備有2－3個(gè)，上面刻有5×、10×或15×符號(hào)以表示其放大倍數(shù)，一般裝的是10×的目鏡。

　?。?）物鏡：裝在鏡筒下端的旋轉(zhuǎn)器上，一般有3－4個(gè)物鏡，其中*短的刻有“10×”符號(hào)的為低倍鏡，較長的刻有“40×”符號(hào)的為高倍鏡，*長的刻有“100×”符號(hào)的為油鏡，此外，在高倍鏡和油鏡上還常加有一圈不同顏色的線，以示區(qū)別。

　　在物鏡上，還有鏡口率(N.A.)的標(biāo)志，它反應(yīng)該鏡頭分辨力的大小，其數(shù)字越大，表示分辨率越高， 各物鏡的鏡口率如下表：

　　物鏡 鏡口率(N.A.) 工作距離(mm)

　　10× 0.25 5.40

　　40× 0.65 0.39

　　100× 1.30 0.11

　　 表中的工作距離是指顯微鏡處于工作狀態(tài)(物象調(diào)節(jié)清楚)時(shí)物鏡的下表面與蓋玻片(蓋玻片的厚度一般為0.17mm)上表面之間的距離，物鏡的放大倍數(shù)愈大，它的工作距離愈小。

　　顯微鏡的放大倍數(shù)是物鏡的放大倍數(shù)與目鏡的放大倍數(shù)的乘積，如物鏡為10×，目鏡為10×，其放大倍數(shù)就為10×10=100。

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　　4，成像系統(tǒng) 在使用過程中，為了方便觀察，通常會(huì)在光學(xué)顯微鏡目鏡上加裝成像系統(tǒng)，將顯微鏡視野內(nèi)的圖像通過成像系統(tǒng)傳送到電子顯示屏上，更好地對顯微鏡視野內(nèi)的標(biāo)本進(jìn)行觀察。如下圖所示：

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　　二，水浸片的制作

　　 在水產(chǎn)疾病的診斷過程中，使用得*多的是將病料組織制成水浸片，放在載物臺(tái)上觀察，詳細(xì)的制作步驟如下：

　　 取一塊干凈的載玻片，在上面滴一滴清水（如果是利用與水直接接觸的組織或器官制作水浸片，淡水品種就使用淡水，海水品種就使用海水，如果是利用不與水接觸的組織器官制作水浸片，則要使用生理鹽水），首先從要檢查的部位取一小塊組織，至于載玻片的水滴中，用鑷子夾住輕輕攪動(dòng)，讓其分散，再取一潔凈的蓋玻片將其一邊與載玻片接觸，傾斜著將蓋玻片輕蓋在待檢組織上，再用鑷子或鉛筆輕壓，讓待檢組織分散。如果水過多，可以用紗布或吸水紙吸去蓋玻片周圍多余的水。這樣，一個(gè)水浸片就制成了。

　　 在制作水浸片的過程中，要注意以下幾點(diǎn)：

　　 1，所取的待檢組織的樣品不宜過多，過多容易引起透光率的不良，影響顯微鏡的觀察。

　　 2，必須先滴水，再放組織，否則會(huì)產(chǎn)生氣泡，影響觀察。

　　 3，水產(chǎn)動(dòng)物不與水接觸的組織器官要用生理鹽水，否則檢查的病原體會(huì)由于滲透壓的不同引起碎裂，皺縮或死亡而影響診斷。

　　 4，水浸片要現(xiàn)場制作，不宜保存。

　　三，普通光學(xué)顯微鏡的使用步驟。

　　1、實(shí)驗(yàn)時(shí)要把顯微鏡放在座前桌面上稍偏左的位置，鏡座應(yīng)距桌沿 6～7 cm左右。

　　2、打開光源開關(guān)，調(diào)節(jié)光強(qiáng)到合適大小。

　　3、轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡頭正對載物臺(tái)上的通光孔。先把鏡頭調(diào)節(jié)至距載物臺(tái)1～2cm左右處，然后用左眼注視目鏡內(nèi)，接著調(diào)節(jié)聚光器的高度，把孔徑光闌調(diào)至*大，使光線通過聚光器入射到鏡筒內(nèi)，這時(shí)視野內(nèi)呈明亮的狀態(tài)。

　　4、將所要觀察的玻片放在載物臺(tái)上，使玻片中被觀察的部分位于通光孔的正中央，然后用標(biāo)本夾夾好載玻片。

　　5、先用低倍鏡觀察（物鏡10X、目鏡10X）。觀察之前，先轉(zhuǎn)動(dòng)粗動(dòng)調(diào)焦手輪，使載物臺(tái)上升，物鏡逐漸接近玻片。需要注意，不能使物鏡觸及玻片，以防鏡頭將玻片壓碎。然后，左眼注視目鏡內(nèi)，同時(shí)右眼不要閉合（要養(yǎng)成睜開雙眼用顯微鏡進(jìn)行觀察的習(xí)慣，以便在觀察的同時(shí)能用右眼看著繪圖），并轉(zhuǎn)動(dòng)粗動(dòng)調(diào)焦手輪，使 載物臺(tái)慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。

　　6、如果在視野內(nèi)看到的物像不符合實(shí)驗(yàn)要求（物像偏離視野），可慢慢調(diào)節(jié)載物臺(tái)移動(dòng)手柄。調(diào)節(jié)時(shí)應(yīng)注意玻片移動(dòng)的方向與視野中看到的物像移動(dòng)的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以調(diào)節(jié)微動(dòng)調(diào)焦手輪，直至物像清晰為止。

　　7、如果進(jìn)一步使用高倍物鏡觀察，應(yīng)在轉(zhuǎn)換高倍物鏡之前，把物像中需要放大觀察的部分移至視野中央（將低倍物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡觀察時(shí)，視野中的物像范圍縮小了很多）。一般具有正常功能的顯微鏡，低倍物鏡和高倍物鏡基本齊焦，在用低倍物鏡觀察清晰時(shí)，換高倍物鏡應(yīng)可以見到物像，但物像不一定很清晰，可以轉(zhuǎn)動(dòng)微動(dòng)調(diào)焦手輪進(jìn)行調(diào)節(jié)。

　　8、在轉(zhuǎn)換高倍物鏡并且看清物像之后，可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)孔徑光闌的大小或聚光器的高低，使光線符合要求（一般將低倍物鏡換成高倍物鏡觀察時(shí)，視野要稍變暗一些，所以需要調(diào)節(jié)光線強(qiáng)弱）。

　　9、觀察完畢應(yīng)先將物鏡鏡頭從通光孔處移開，然后將孔徑光闌調(diào)至*大，再將載物臺(tái)緩緩落下，并檢查零件有無損傷，特別要注意檢查物鏡是否沾水沾油，如沾了水或油要用鏡頭紙擦凈，檢查處理完畢后即可鋪上防塵布。

　　四，顯微鏡不同倍數(shù)鏡頭的使用方法

　　1．低倍鏡的使用方法

　?。?）取鏡和放置：顯微鏡平時(shí)存放在柜或箱中，用時(shí)從柜中取出，右手緊握鏡臂，左一手托住鏡座,將顯微鏡放在自己左肩前方的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，鏡座后端距桌邊1－2寸為宜，便于坐著操作。

　?。?）對光：用拇指和中指移動(dòng)旋轉(zhuǎn)器(切忌手持物鏡移動(dòng))，使低倍鏡對準(zhǔn)鏡臺(tái)的通光孔(當(dāng)轉(zhuǎn)動(dòng)聽到碰叩聲時(shí)，說明物鏡光軸已對準(zhǔn)鏡筒中心)。打開光圈，上升集光器，并將反光鏡轉(zhuǎn)向光源，以左眼在目鏡上觀察(右眼睜開),同時(shí)調(diào)節(jié)反光鏡方向，直到視野內(nèi)的光線均勻明亮為止。

　?。?）放置玻片標(biāo)本：取一玻片標(biāo)本放在鏡臺(tái)上，一定使有蓋玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器彈簧夾夾住，然后旋轉(zhuǎn)推片器螺旋，將所要觀察的部位調(diào)到通光孔的正中。

　?。?）調(diào)節(jié)焦距：以左手按逆時(shí)針方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺(tái)緩慢地上升至物鏡距標(biāo)本片約5毫米處，應(yīng)注意在上升鏡臺(tái)時(shí)，切勿在目鏡上觀察。一定要從右側(cè)看著鏡臺(tái)上升，以免上升過多，造成鏡頭或標(biāo)本片的損壞。然后，兩眼同時(shí)睜開，用左眼在目鏡上觀察，左手順時(shí)針方向緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使鏡臺(tái)緩慢下降，直到視野中出現(xiàn)清晰的物象為止。

　　 如果物象不在視野中心，可調(diào)節(jié)推片器將其調(diào)到中心(注意移動(dòng)玻片的方向與視野物象移動(dòng)的方向是相反的)。如果視野內(nèi)的亮度不合適，可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調(diào)節(jié)，如果在調(diào)節(jié)焦距時(shí)，鏡臺(tái)下降已超過工作距離(>5.40mm)而未見到物象，說明此次操作失敗，則應(yīng)重新操作，切不可心急而盲目地上升鏡臺(tái)。

　　2．高倍鏡的使用方法

　?。?）選好目標(biāo)：一定要先在低倍鏡下把需進(jìn)一步觀察的部位調(diào)到中心，同時(shí)把物象調(diào)節(jié)到*清晰的程度，才能進(jìn)行高倍鏡的觀察。

　?。?）轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，調(diào)換上高倍鏡頭，轉(zhuǎn)換高倍鏡時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)速度要慢，并從側(cè)面進(jìn)行觀察(防止高倍鏡頭碰撞玻片)，如高倍鏡頭碰到玻片，說明低倍鏡的焦距沒有調(diào)好，應(yīng)重新操作。

　?。?）調(diào)節(jié)焦距：轉(zhuǎn)換好高倍鏡后，用左眼在目鏡上觀察，此時(shí)一般能見到一個(gè)不太清楚的物象，可將細(xì)調(diào)節(jié)器的螺旋逆時(shí)針移動(dòng)約0.5－1圈，即可獲得清晰的物象(切勿用粗調(diào)節(jié)器!)

　　如果視野的亮度不合適，可用集光器和光圈加以調(diào)節(jié)，如果需要更換玻片標(biāo)本時(shí)，必須順時(shí)針(切勿轉(zhuǎn)錯(cuò)方向)轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡臺(tái)下降，方可取下玻片標(biāo)本。

　　3．油鏡的使用方法

　?。?）在使用油鏡之前，必須先經(jīng)低、高倍鏡觀察，然后將需進(jìn)一步放大的部分移到視野的中心。

　?。?）將集光器上升到*高位置，光圈開到*大。

　?。?）轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)油鏡，在轉(zhuǎn)換油鏡時(shí)，從側(cè)面水平注視鏡頭與玻片的距離，使鏡頭浸入油中而又不以壓破載玻片為宜。

　　（4）用左眼觀察目鏡，并慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。

　　如果不出現(xiàn)物象或者目標(biāo)不理想要重找，在加油區(qū)之外重找時(shí)應(yīng)按：低倍→高倍→油鏡程序。在加油區(qū)內(nèi)重找應(yīng)按：低倍→油鏡程序，不得經(jīng)高倍鏡，以免油沾污鏡頭。

　?。?）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭上和標(biāo)本上的香柏油擦去，然后再用干擦鏡紙擦干凈。

　　五，顯微鏡使用的注意事項(xiàng)

　　（一）、 正確安裝的問題

　　 使用顯微鏡前，首先要把顯微鏡的目鏡和物鏡安裝上去。目鏡的安裝較為簡單，主要的問題在于物鏡的安裝，由于物鏡鏡頭較貴重，萬一安裝時(shí)螺紋沒合好，易摔到地上，造成鏡頭損壞，所以為了保險(xiǎn)起見，強(qiáng)調(diào)操作者在安裝物鏡時(shí)要用左手食指和中指托住物鏡，然后用右手將物鏡裝上去，這樣即使沒安裝好，也不會(huì)摔到地上。

　?。ǘ⒄_對光的問題

　　 對光是使用顯微鏡時(shí)很重要的一步，有些操作者在對光時(shí)，隨便轉(zhuǎn)一個(gè)物鏡對著通光孔，而不是按要求一定用低倍鏡對光。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡時(shí)喜歡用一只手，往往將反光鏡扳了下來。所一定要強(qiáng)調(diào)用低倍鏡對光，當(dāng)光線較強(qiáng)時(shí)用小光圈、平面鏡，而光線較弱時(shí)則用大光圈、凹面鏡，反光鏡要用雙手轉(zhuǎn)動(dòng)，當(dāng)看到均勻光亮的圓形視野為止。光對好后不要再隨便移動(dòng)顯微鏡，以免光線不能準(zhǔn)確地通過反光鏡進(jìn)入通光孔。

　?。ㄈ?、正確使用準(zhǔn)焦螺旋的問題

　　 使用準(zhǔn)焦螺旋調(diào)節(jié)焦距，找到物象可以說是顯微鏡使用中*重要的一步，也是操作者感覺*為困難的一步。操作者在操作過程中極易出現(xiàn)以下錯(cuò)誤：一是在高倍鏡下直接調(diào)焦；二是不管鏡筒上升或下降，眼睛始終在往目鏡中看視野；三是不了解物距的臨界值，物距調(diào)到2~3厘米時(shí)還在往上調(diào)，而且轉(zhuǎn)動(dòng)準(zhǔn)焦螺旋的速度很快。前兩種錯(cuò)誤結(jié)果往往造成物鏡鏡頭抵觸到裝片，損傷裝片或鏡頭，而第三種錯(cuò)誤則是操作者使用顯微鏡時(shí)*常見的一種現(xiàn)象。針對以上錯(cuò)誤，操作者要注意，調(diào)節(jié)焦距一定要在低倍鏡下調(diào)，先轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒慢慢下降，物鏡靠近載玻片，但注意不要讓物鏡碰到載玻片，在這個(gè)過程中眼睛要從側(cè)面看物鏡，然后用左眼朝目鏡內(nèi)注視，并慢慢反向調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒徐徐上升，直當(dāng)看到物像為止。一般顯微鏡的物距在1厘米左右，所以如果物距已遠(yuǎn)超過1厘米，但仍未看到物像，那可能是標(biāo)本未在視野內(nèi)或轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋速度過快，此時(shí)應(yīng)調(diào)整裝片位置，然后再重復(fù)上述步驟，當(dāng)視野中出現(xiàn)模糊的物像時(shí)，就要換用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)節(jié)，只有這樣，才能縮小尋找范圍，提高找到物像的速度。

　?。ㄋ模?、物鏡轉(zhuǎn)換的問題

　　 使用低倍鏡后換用高倍鏡，操作者往往喜歡用手指直接推轉(zhuǎn)物鏡，認(rèn)為這樣比較省力，但這樣容易使物鏡的光軸發(fā)生偏斜，原因是轉(zhuǎn)換器的材料質(zhì)地較軟，精度較高，螺紋受力不均勻很容易松脫。一旦螺紋破壞，整個(gè)轉(zhuǎn)換器就會(huì)報(bào)廢。操作者應(yīng)手握轉(zhuǎn)換器的下層轉(zhuǎn)動(dòng)板轉(zhuǎn)換物鏡。

　　（五）、正確用眼的問題

　　 用顯微鏡觀察物體時(shí)，應(yīng)雙眼同時(shí)睜開，左眼往目鏡內(nèi)注視。但有不少操作者往往做不到這一點(diǎn)，喜歡用手捂住右眼或干脆閉上右眼，這是不符合實(shí)驗(yàn)的觀察要求的，這種不良習(xí)慣會(huì)造成左眼疲勞，同時(shí)也不能做到邊觀察邊畫圖。應(yīng)該注意，左眼要盡量貼近目鏡，右眼試圖向視野內(nèi)注視，如此反復(fù)訓(xùn)練，就會(huì)達(dá)到雙目同時(shí)睜開觀察的要求。或者也可以通過做以下練習(xí)：睜開雙眼，用一張紙或手掌豎立在兩眼之間，鼻子跟前，使左右眼不能互看對側(cè)一邊，然后有意識(shí)地先看左邊，再看右邊，如此3~5次，每天早晚各做一遍，不到一星期便可學(xué)會(huì)。

　?。┮曇皟?nèi)污點(diǎn)判斷的問題

　　轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，污點(diǎn)移動(dòng)則在目鏡上。不移動(dòng)則不在目鏡上

　　移動(dòng)玻片，污點(diǎn)移動(dòng)則在玻片上。不移動(dòng)則不在玻片上

　　如果視野內(nèi)的污點(diǎn)不在玻片和目鏡上，那就在物鏡上。

　?。ㄆ撸╋@微鏡視野內(nèi)玻片的移動(dòng)與物像的移動(dòng)

　　由于是倒立的像，玻片的移動(dòng)方向與物像移動(dòng)的方向相反。

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　?。ò耍┦褂眠^程中其他需要注意的問題

　　1．持鏡時(shí)必須是右手握臂、左手托座的姿勢，不可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。

　　2．輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)的邊緣，以免碰翻落地。

　　3．保持顯微鏡的清潔，光學(xué)和照明部分只能用擦鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機(jī)械部分用布擦拭。

　　4．水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和鏡臺(tái)，如果沾污應(yīng)立即擦凈。

　　5．放置玻片標(biāo)本時(shí)要對準(zhǔn)通光孔中央，且不能反放玻片，防止壓壞玻片或碰壞物鏡。

　　6．要養(yǎng)成兩眼同時(shí)睜開的習(xí)慣，以左眼觀察視野，右眼用以繪圖。

　　7．不要隨意取下目鏡，以防止塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。

　　8．使用完畢后，必須復(fù)原才能放回鏡箱內(nèi)，其步驟是：取下標(biāo)本片，轉(zhuǎn)動(dòng)旋轉(zhuǎn)器使鏡頭離開通光孔，下降鏡臺(tái)，平放反光鏡，下降集光器(但不要接觸反光鏡)、關(guān)閉光圈，推片器回位，蓋上綢布和外罩，放回實(shí)驗(yàn)臺(tái)柜內(nèi)。*后填寫使用登記表。(注：反光鏡通常應(yīng)垂直放，但有時(shí)因集光器沒提至應(yīng)有高度，鏡臺(tái)下降時(shí)會(huì)碰壞光圈，所以這里改為平放。